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제품명: BTXPRESS ELECTROPORATION SOLUTION

제조사: BTX

개요: 이전에는 화학적 및 기타 비바이러스성 방법으로 "트랜스펙션하기 어려운" 것으로 간주되었던 유전자를 포유동물 세포에 빠르고 효율적으로 전달하기 위해 개발된 단일 완충 용액입니다.

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제품자료

BTXPRESS ELECTROPORATION SOLUTION

BTXpress 전기천공 솔루션은 기존 화학적 방법이나 비바이러스성 방법으로 형질전환이 어려웠던 포유류 세포에 DNA는 물론 siRNA까지 빠르고 효율적으로 전달할 수 있도록 개발된 단일 버퍼 솔루션입니다.

Procedure

A. Preparation of cells

배양 중인 세포를 ATCC 권장 조건 및 밀도로 유지합니다. 전기천공 18-24시간 전 계대 배양을 통해 최적 밀도(현탁 세포: 1-2x10⁶ cells/ml, 부착 세포: 70-80% 컨플루언시 상태)를 확보합니다.

B. Prepare for electroporation

모든 솔루션을 실온에서 15-30분간 워밍합니다. 세포를 수확/카운팅한 후, 아래 공식을 사용하여 필요한 세포 부피를 계산합니다.

Electroporation에 필요한 상세 세포 밀도

원심분리(1000xg, 5분) 후 상층액을 제거하고 BTXpress 솔루션에 재현탁합니다.

BTXpress 솔루션 내 15분 이상 방치 금지.

C. Perform electroporation

DNA(ml당 20µg)를 혼합하고 큐벳에 분주합니다. 실온에서 펄스를 인가한 직후, 따뜻한 배지가 포함된 배양 용기로 즉시 이동합니다.

전기천공 후 15분 초과 배양 시 세포 손상 위험. ▶ Quick Reference Guide

Recommended electroporation conditions

Square Wave Systems

Cell Type	Cuvette	Density(10^6)	Voltage	Pulses	Length(ms)
MEF	2mm/4mm	5	170/240	1	15/15-20
Jurkat E6-1	2mm/4mm	10	180/290	1	15/15-20
Niks	2mm/4mm	3	180/300	1	15/15-20

Exponential Decay Wave Systems

Cell Type	Cuvette	Density	Voltage	Cap(µF)	Res(ohms)
MEF	2mm/4mm	5	150/230	950	None
Jurkat E6-1	2mm/4mm	10	150/260	950	None
Niks	2mm/4mm	3	170/280	950	None
SK-N-MC	2mm/4mm	5	90/240	950	None
K562	2mm/4mm	10	130/250	950	None
HL-60	2mm/4mm	10	110/275	950	None
RAW 264.7	2mm/4mm	5	140/260	950	None
THP-1	2mm/4mm	10	125/250	950	None
HEK-293	2mm/4mm	5	160/250	950	None
PC-12	2mm/4mm	3	130/240	950	None

Result

Table 1: BTXpress® “High Performance Electroporation Solution" vs. Amaxa™ Nucleofector®.

BTX ECM 830 Square Wave 전기천공기와 BTXpress™ 고성능 전기천공 솔루션을 사용하여 EGFP 리포터 벡터를 전기천공한 결과입니다. Amaxa™ 시스템과 병행하여 실험하였으며, 24시간 후 유세포 분석을 통해 확인한 생존 세포 집단 내 EGFP 발현 비율을 나타냅니다.

Table 2: BTXpress® Solution Transfection Efficiency vs. Amaxa™:

BTX 전기천공 시스템과 BTXpress™ 고성능 전기천공 솔루션(또는 PBS)을 사용하여 EGFP 리포터 벡터를 전기천공한 결과입니다. Amaxa™ 키트 V 솔루션을 사용한 Amaxa™ 시스템 결과와 비교하였으며, 24시간 후 유세포 분석을 통해 확인한 생존 세포 집단 내 EGFP 발현 비율을 나타냅니다.

Troubleshooting

1. Low Electroporation Efficiency (낮은 전기천공 효율)

Problem	Solution
Suboptimal DNA to Cells Ratio	각 세포 타입에 최적화된 DNA 대 세포 비율을 결정하십시오.
Low Cell Density	각 세포 타입에 적절한 세포 밀도를 최적화하십시오.
Cells not in Active Growth Phase	전기천공 18-24시간 전 세포를 계대 배양하십시오.
Low-Quality DNA	고순도, 무균, 불순물이 없는 DNA를 사용하십시오. 미니프렙 키트나 에탄올 침전법은 피하십시오.
Post-Electroporation Incubation	12-48시간 범위 내에서 최적의 배양 시간을 테스트하십시오.
Cell Morphology / Passage	재현성을 위해 실험 간 유사한 계대 번호의 세포를 사용하십시오.
Suboptimal DNA Concentration	전기천공 믹스당 20 µg/ml의 DNA 농도를 사용하십시오.

2. High Cellular Toxicity (높은 세포 독성)

Problem	Solution
Delayed Transfer	전기천공 직후 즉시 배양 배지가 담긴 용기로 세포를 이동시키십시오.
Pulse Strength is too High	전압 및 펄스 길이를 점진적으로 감소시켜 조절하십시오.
Cell Morphology / Passage	너무 높거나 낮은 계대 번호는 독성을 유발할 수 있으므로 일정하게 유지하십시오.
Endotoxin Contaminated DNA	고순도 정제 DNA를 사용하십시오(CsCl 그래디언트 또는 음이온 교환 방식 권장).

SPECIFICATIONS

Volume	2.0, 5.0, 10.0 ml
Endotoxin	< 0.125 EU/ml
RNase	< 0.5 pg of RNAse activity
DNase	< 10 pg of DNAse activity
Sterility	Sterile filtered (Assayed for 3 days)
Storage	2 to 8°C
Shelf Life	1 year from date of purchase

주문 정보 (Ordering Information)

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품목 번호	제품명	포함 내용	가격 (VAT 별도)
45-0803	BTXpress 솔루션 키트 (2mm)	5 mL 솔루션, 2 mm 큐벳 5팩, 피펫	가격 문의
45-0804	BTXpress 솔루션 키트 (4mm)	5 mL 솔루션, 4 mm 큐벳 2팩, transfer 피펫	가격 문의
45-0806	BTXpress 솔루션 키트 (2mm)	10 mL 솔루션, 2 mm 큐벳 2팩, transfer 피펫	가격 문의
45-0807	BTXpress 솔루션 키트 (4mm)	10 mL 솔루션, 4 mm 큐벳 4팩, transfer 피펫	가격 문의
45-0801	BTXpress 솔루션 2 mL	최대 20회 반응 가능	₩420,000
45-0802	BTXpress 솔루션 5 mL	최대 50회 반응 가능	₩920,000
45-0805	BTXpress 솔루션 10 mL	최대 100회 반응 가능	₩1,300,000