Solentim의 ICON 장비는 클론 선별 및 단백질의 생물학적 특성을 분석할 수 있는 All-in-One 장비로써, IgG의 titer 측정, Trypan blue를 이용한 Viable cell counting, 단백질의 glycosylation을 빠르게 평가할 수 있는 application을 소프트웨어에서 지원하고 있습니다.

ICON의 다양한 application 중 단백질의 Glycosylation screening 평가에 관련한 Application note를 소개해드립니다.

ICON은 PAIA Biotech사와 협력하여 단백질의 Glycan profile을 반정량적으로 스크리닝하고, CLD 실험실에서 몇 시간 내에 샘플의 랭킹을 매길수 있도록 ICON 소프트웨어에 분석 tool을 도입하였습니다. 

Glycan screening 분석은 샌드위치 형식의 면역 분석법으로써 이 방법에서는 384-well plate내의 캡처 비드가 분석 대상의 Fc 도메인에 결합하고, 형광 표지된 lectin이 Fc 융합 단백질에 존재하는 glycan에 결합하는 방식으로 측정됩니다. Lectin에 표지된 형광 정도를 측정함으로써 단백질이 어떠한 glycan 특성을 가지는지 반정량적으로 평가할 수 있습니다. 

PAIA Glycan screening assay kit은 6개의 glycan을 분석할 수 있도록 각 glycan에 특이적으로 결합하는 형광 표지된 렉틴을 제공하고,

Fc 도메인과 결합하는 bead가 포함된 384-well plate를 함께 제공합니다.

하나의 384-well plate에서 최대 6개의 Glycan을 분석할 수 있습니다.

* 384 well PAIAplate의 예시 well에서 Glycosylation screening 분석법의 워크플로우

Application Note

Fc 융합 단백질의 CQA 관련 glycosylation의 빠른 평가를 위한 Lectin 기반 스크리닝 분석법

Lectin-based screening assays for the fast assessment of CQA-related glycosylation of Fc fusion proteins

Abstract

Fc 퓨전 단백질은 단백질의 치료적 잠재력과 IgG Fc 도메인의 추가적인 이점을 결합한 생물학적 치료제입니다. 당화, 특히 시알화는 Fc 퓨전 단백질의 중요한 품질 속성(CQA)으로, 이러한 분자의 발견 및 개발 과정에서 모니터링해야 할 중요한 파라미터입니다.

이 노트에서는 많은 샘플에 대해 중요한 CQA에 대한 반정량적인 데이터를 얻기 위한 이상적인 도구인 빠른 렉틴기반 고속 당화 스크리닝 분석법(제품 번호: PA-201)을 설명합니다. 이 분석법은 세 가지 잘 알려진 Fc 퓨전 단백질 (Etanercept(Enbrel), Aflibercept(Zaltrap, Eylea), Efmoroctocog alfa(Eloctate, Elocta))에 대한 데이터를 제공합니다. 또한, 세 가지 다른 글리코시다제를 처리하여 이들 분자의 다양한 당화 변형을 생성하여 사용된 렉틴의 결합 특이성을 입증했습니다. 이를 통해 아직 보고되지 않은 efmoroctocog에서 O-당화의 존재에 대한 증거를 수집할 수 있었습니다.

* 첨부파일에서 전체 내용을 확인하실 수 있습니다.